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          血培養檢驗中常見的10大問題,你想知道的都在這!


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          問題1:涂片與培養結果不一致分析

          血培養瓶陽性報警,革蘭染色涂片查見細菌,但轉種血瓊脂平板,巧克力瓊脂平板,麥康凱培養基未見細菌生長,可能有以下幾種情況:


          第一種:延長培養時間(對于某些生長緩慢的革蘭陰性桿菌)血培養陽性瓶轉種后,實驗室一般培養24-48h后觀察其生長情況,只能滿足大多數細菌,但是忽略了一些生長緩慢的細菌(如軍團軍屬,布魯菌屬和二氧化碳嗜纖維菌)碰到該情況應該把培養物置二氧化碳培養箱延長培養時間,最多可以是2-4周。


          第二種:需要添加營養成分和特殊生長因子,例如乏養菌屬和顆粒鏈菌屬可轉種含有維生素B6、半胱氨酸及營養成分高的血瓊脂平板,可以種衛星試驗。


          第三種:營養要求高(上述情況還不生長)可以用血培養瓶肉湯配制培養基。

          問題2:如何鑒別假陽性和假陰性

          血培養瓶陽性報警后,抽取培養瓶內肉湯直接涂片革蘭染色鏡檢。鏡檢找不到細菌,也可以通過分離膠促凝管對細菌進行離心富集,然后取離心后分離膠上面的灰白色沉淀進行革蘭染色,或者再采用瑞氏染色后鏡檢。若仍未查見細菌,且儀器沒有生長曲線表現,可以認為是假陽性。


          血培養儀器不報警,但是培養物查見細菌,轉種平板也有細菌生長,即為假陰性。

          問題3:如何鑒別染液沉渣,白細胞,酵母菌和革蘭陽性球菌

          革蘭陽性球菌的鏡下形態完整,邊緣清晰,染色均勻;而染液沉渣的形態各異并且邊緣模糊,染色不均。轉動顯微鏡微調焦距,細菌沒有折光性,而沉渣則相反。白細胞核的形態多樣,結構有疏松和致密之分,染色深淺不均;而酵母菌呈圓形或卵圓形,染色均勻。

          問題4:血培養陽性報警,有生長曲線,涂片革蘭染色找不到細菌

          如果血培養陽性報警,且有生長曲線,就一定有細菌生長。由于有些細菌與染液沉渣混在一起,不易分辨,可以通過分離膠促凝管對細菌進行離心富集,然后取離心后分離膠上面的灰白色沉淀進行革蘭染色;蛘咧匦氯£栃匝囵B瓶內培養物涂片做瑞氏染色。在瑞氏染色涂片中可以保持細胞的完整性,沒有過多的細胞碎渣干擾鏡檢,易查見形態清楚的染色為藍紫色的細菌,但是瑞氏染色不能分辨病原菌的陰陽屬性?梢愿鶕锾m染色背景判斷是革蘭陽性還是陰性菌。

          問題5:如何判斷兩瓶血培養的結果

          兩瓶血培養出現一瓶陽性,一瓶陰性,應首先分析細菌的種類。若檢出皮膚定植菌,一般考慮是污染菌;若檢出革蘭陰性桿菌傾向于感染;若陽性瓶檢出的是金黃色葡萄球菌或其他條件致病菌,需要與臨床醫生和實驗室人員相互溝通,綜合分析建議重復采血培養。若兩瓶均為陽性但檢出不同細菌,如分別為陽性桿菌,微球菌時,可認為是污染菌;若是革蘭陽性球菌如CNS和陽性桿菌傾向于污染,建議重復采血培養;相反若其中一瓶為金黃色葡萄球菌或大腸埃希菌等,另一瓶為皮膚定植菌,應及時和臨床醫生溝通。

          問題6:如何判斷是否復數菌感染

          如果遇到兩瓶血培養結果均為陽性,兩瓶的菌種鑒定結果一致,均為兩種細菌,應考慮復數菌感染。如遇到兩瓶中只有一瓶檢出2種細菌,應及時與臨床溝通。

          問題7:血培養中無法鑒定的細菌如何處理

          對于實驗室無法鑒別的細菌,首先要結合臨床和實驗室數據判斷是否為病原菌。若為病原菌,應根據細菌的鏡下形態和革蘭染色結果進行初步藥敏試驗,盡快將藥敏的初步結果告知臨床。在報告上注明需要注明需要進一步鑒定,然后做進一步鑒定。根據染色情況可以進一步加做生化試驗。如果有條件可采用質譜或分子生物學方法進行鑒定或送上一級實驗室鑒定。

          問題8:細菌涂片結果與培養結果不一致

          首先要確認血培養瓶里有幾種細菌生長。多種細菌生長的時候,可能報陽后涂片的細菌與轉種后涂片的細菌不是同一種細菌,細菌形態肯定不一致。出現有復合細菌生長應該對培養物進行涂片確認。如果是單一細菌生長,涂片形態不一致,應考慮細菌在肉湯或瓊脂上生長,其生長環境有差異,可能會有此情況,但該種情況很少出現。另外出現錯誤是會把細菌的陰陽性弄混淆,例如肺炎克雷伯菌會染色為陽性球菌。發生這樣的情況主要原因是實驗室沒有堅持每天做室內質控,必要時可以采用鮑曼不動桿菌和腸球菌的混合菌株進行質控染色。

          問題9:檢驗方法的局限性

          血液和其他正常無菌體液培養檢測中涉及的許多變量實際無法控制,血培養并不能完全體現病原菌在人體的生存狀況。因而血培養無法提供完全置信度。


          1、血液標本中白細胞數量過多,細胞在溶解中可以釋放出二氧化碳。則可能提示培養瓶陽性。


          2、血液中的微生物數量一般微乎其微,可能斷斷續續出現,因此應該從患者體內連續采集血樣。


          3、血培養瓶陽性報警,應該迅速處理,以避免可能自溶或其他原因導致的無活力培養物。例如肺炎鏈球菌極易溶解。


          4、抗凝劑聚茴香腦磺酸鈉(SPS)能夠中和溶菌酶,抑制吞噬作用,使部分氨基糖苷類失活,抑制部分補體串聯。但是SPS會抑制部分細菌生長,如流感嗜血桿菌、腦膜炎奈瑟球菌、淋病奈瑟球菌、厭氧消化鏈球菌以及卡他莫拉菌。所以建議懷疑上述細菌時不選用此類培養方法。腦脊液不建議使用血培養瓶培養。

          問題10:血培養瓶需氧瓶長厭氧菌,厭氧瓶長需氧菌

          1、需氧瓶長厭氧菌


          主要是因為現在的需氧瓶中都添加了L-半胱氨酸,是特殊細菌的生長因子。同時L-半胱氨酸還是一種具有還原性的氨基酸,在培養基中會耗掉部分氧氣,導致氧化還原電勢降低,從而適合某些對氧不嚴格的厭氧菌的生長。


          另外一個原因是有些感染很重的患者,血氧飽和度低,加之白細胞高,劇烈的呼吸作用消耗過多的氧氣,導致血培養瓶中氧氣缺乏,電勢降低。此時厭氧菌也能生長。


          2、厭氧瓶生長專性需氧菌


          在整個血培養瓶的研發個過程中為了厭氧瓶不漏檢,會在培養基中加入一定濃度的精氨酸和硝酸鐵,這兩樣物質可以替代氧氣作為呼吸作用中氧化磷酸化電子傳遞的終末受體,此時即使沒有氧氣的存在,需氧菌的呼吸作用依然能順利進行,細菌依然能通過替代途徑獲取能量。因此,需氧菌在厭氧瓶內是可以生長的。


          血培養檢驗是一個復雜的過程,要善于在平時積累經驗,要對日常中發現的情況多問個為什么。同時在整個檢驗過程要注意基本操作,堅持每日的室內質控。


          只有把小事都做好了,才能夠最終有一個好的結果,本文中有許多問題的解決方式是我本人在日常工作中的經驗積累,沒有得到任何官方認證,請大家多多批評指正。


          【參考文獻】

          1徐英春. 臨床微生物學血培養操作規范[J]. 中華檢驗醫學雜志, 2004, 27(2):124-126.

          2 卜靜雅, 馬超超, 寧安紅,等. 陽性血培養涂片結果與培養結果不一致的原因探討[J]. 中國微生態學雜志, 2017(12):1452-1455.


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