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          PCR實驗室消除污染操作步驟

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          1、物料準備

          (1)購買噴壺(能夠噴出霧狀水汽的即可);

          (2)購買市面上有效氯消毒片,根據要求配制不同濃度的消毒液,或者購買成品次氯酸鈉消毒液配制合適濃度消毒水;

          (3)購買核酸氣溶膠污染清除劑(DNA AWAY®原液/MediClean®稀釋100倍);

          (4)無紡布/無塵紙等。

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          2、處理方法

          (1)清理廢液缸并且對廢液缸用有效氯含量為2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染;

          (2)用有效氯含量為2000mg/L消毒水對移液槍進行擦洗,關鍵部位為移液槍前端易污染部位,清潔干凈后用潔凈水再擦拭一遍;

          (3)將離心管架、擴增管架、擴增管架底板、吸嘴盒及其他相關物品用有效氯含量為500mg/L的消毒水浸泡2小時后,用清水沖洗干凈晾干后使用;

          (4)對污染區域內的設備如擴增儀、全自動提取儀等,使用核酸氣溶膠污染清除劑進行反復處理;對生物安全柜等含有空氣過濾系統的設備,需更換過濾網;

          (5)用有效氯含量為500mg/L的消毒液對整個實驗室(地板、墻面、天花板、門、窗戶等地方)進行清潔,并且用用有效氯含量為1000mg/L的消毒水對實驗室進行噴霧消毒(重點部位為操作區),有效降解空氣中的氣溶膠與附著在實驗臺表面的核酸污染;同時加大通風量(內循環無用,盡可能外循環);

          (6)待污染區域及設備器件清理完成后,常用設備和操作臺面使用移動紫外消毒車近距離輻照1小時;實驗室內則使用室內紫外燈整晚輻照。

          步驟(1)-(6)必須堅持每天進行,確保消除實驗室污染;

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          3、污染消除判斷標準

          設計陰性對照組,根據陰性對照確認污染情況?墒褂贸ㄩ_后隔夜放置操作區的陰性對照進行實驗(在單獨的實驗室驗證),若連續三天陰性對照沒有起跳,則說明污染得到控制,可恢復正常實驗。

          當然,為最大程度的降低可能出現的PCR污染或杜絕污染的出現,在實驗室前期設計及日常實驗室管理和操作中,就需要進行合理的規劃以及嚴格執行實驗室SOP,把污染的可能性扼殺在搖籃中。


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